什么是传代：术语解释

什么是传代

传代（Passage / Subculture）是指当培养器皿中的细胞生长到一定密度（通常 70–90% 融合度）时，将其从原器皿分离、稀释后转移到新器皿继续培养的过程。贴壁细胞常用胰酶-EDTA 消化使细胞脱壁，离心后重悬接种到新培养瓶；悬浮细胞直接稀释传代即可。每次传代记为”一代”（P1、P2…），代次越高细胞系累积的遗传漂变和表型变化越多。传代既是日常维持细胞系的常规操作，也是下游实验（铺板、冻存、转染）的细胞来源。

实验中为什么重要

传代质量决定细胞状态稳定性、实验可重复性和细胞系身份。传代时机过晚（>100% 融合）会让细胞进入接触抑制或凋亡，增殖能力下降、形态扁平化、信号通路异常；消化时间过长（>5–10 min）会损伤膜蛋白和 integrin，传代后贴壁差、死亡率高；传代比例过高（如 1:10）会让细胞经历”低密度滞后期”，1–2 天不长，反而比 1:6 传代慢。冻存细胞复苏后前 1–2 代用于恢复状态，第 3–10 代是实验最佳窗口；超过 20–30 代后多数细胞系出现核型异常、药物敏感性漂移，需重新复苏低代次细胞。

常见误区

1. 不记录代次：用 P30 的细胞做药物实验，结果与文献对不上才发现是代次过高导致。
2. 消化时间”凭感觉”：晃动培养瓶看到细胞脱落就停，但显微镜下仍有大片未脱壁细胞，导致铺板密度严重偏低。
3. 传代比例固定不变：生长慢的细胞按 1:3 传代，密度过低进入滞后期；生长快的细胞按 1:10 传代，48 小时又过度融合。
4. 胰酶未彻底中和：直接吹打后不离心或加等量血清中和，残留胰酶在传代后继续消化细胞，贴壁延迟。

相关工具

本术语暂无对应在线工具，可使用细胞计数仪或血球计数板辅助确定传代后密度。

相关阅读

• 细胞传代指南
• 传代后细胞贴壁慢排查
• 细胞接触抑制丢失排查
• 细胞计数不准排查