🧫 常用细胞系培养条件表

适用场景

细胞复苏、换液、传代和铺板时，需要快速确认细胞系的培养基配方、血清类型、传代比例和推荐接种密度。 本表汇总分子生物学和细胞生物学实验中最常用的细胞系，适合在冻存复苏、转染铺板、稳转株构建前查阅，避免因培养基或血清类型选错导致状态下降。

参数速查表

细胞系	来源	培养基	血清	传代比例	接种密度 (cells/mL)	注意事项
HEK293T	人胚胎肾	DMEM	10% FBS	1:5–1:10	2–5×105	转染效率高；贴壁较松，操作轻柔
HeLa	人宫颈癌	DMEM	10% FBS	1:6–1:8	2–5×105	贴壁强，生长快；注意支原体筛查
CHO	中国仓鼠卵巢	F-12 或 DMEM/F12	10% FBS	1:5–1:8	2–5×105	蛋白表达常用；可悬浮适应
NIH3T3	小鼠胚胎成纤维	DMEM	10% CS	1:3–1:6	3–5×105	接触抑制明显；血清浓度影响形态
BHK21	仓鼠肾	GMEM 或 DMEM	10% FBS	1:4–1:8	2–5×105	痘病毒载体常用；接触抑制弱
COS-7	非洲绿猴肾	DMEM	10% FBS	1:3–1:6	2–5×105	SV40 瞬时表达系统；传代勿过密
Sf9	昆虫卵巢	Sf-900 II SFM	无血清	1:4–1:5	0.5–1×106	悬浮培养；杆状病毒表达系统
Raw264.7	小鼠巨噬	DMEM	10% FBS	1:3–1:5	2–5×105	半贴壁，传代用细胞刮或轻柔吹打
HepG2	人肝癌	DMEM	10% FBS	1:3–1:6	2–5×105	贴壁强，形成多层；传代需充分消化
293	人胚胎肾	DMEM	10% FBS	1:5–1:10	2–5×105	293T 的母系；不含 SV40 T 抗原

使用注意

• 表中所列为各细胞系的”默认”条件，实际最优培养基可能因亚系、来源实验室和用途不同而异；新引入细胞系应优先沿用提供方推荐的培养基和血清，再逐步过渡。
• HEK293T 贴壁较松，传代时不要过度消化，否则细胞会成片脱落且状态下降；EDTA 消化时间建议 ≤3 min。
• NIH3T3、BHK21 等”成纤维样”细胞对血清类型敏感，牛血清（CS）与胎牛血清（FBS）对生长和接触抑制行为影响明显，换血清前要做平行对比。
• Raw264.7 等半贴壁巨噬细胞不建议用胰酶过度消化，可用细胞刮或冷 PBS 轻柔吹打，避免激活细胞影响后续实验。
• 无血清培养基（如 Sf-900 II）适应后不建议频繁回加血清，否则细胞会重新依赖血清并状态波动。
• 接种密度仅供参考；转染、药筛、流式等下游实验对铺板密度有额外要求，需结合具体流程调整。
• 所有细胞系应定期进行支原体检测，交叉污染和误鉴也是常见问题，重要实验前建议做 STR 鉴定。

常见问题

细胞复苏后死亡率高，是培养基选错了吗？

不一定。冻存保护剂残留、融化速度、复苏后即刻换液都会显著影响存活率。 建议先核对冻存时使用的培养基和血清是否与现用一致，并确认复苏流程：37 °C 水浴快速融化、低速离心去除 DMSO、接种后 12–24 h 内换液。可参考 细胞复苏后死亡较多怎么办 排查。

不同实验室来源的同一细胞系培养基不同，该听谁的？

优先沿用细胞来源实验室提供的培养基配方。很多细胞系存在亚系差异（如 293 与 293T、HeLa 的高/低贴壁亚系），最适血清浓度和添加剂也不同。 若需更换培养基，建议分两步过渡（1:1 混合传代 2–3 次后再全换），并密切观察细胞形态和倍增时间。

表中接种密度怎么换算到具体培养皿？

表中密度为悬浮接种时细胞悬液的浓度。铺到 6 孔板、10 cm 皿时，按目标每孔/每皿的总细胞数换算体积即可。 例如 HEK293T 接种 10 cm 皿，通常铺 3–5×10⁶ cells/皿，约对应表中 2–5×10⁵ cells/mL 的悬液 10 mL。具体密度需结合实验目的（转染、药筛、扩增）调整。

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