ELISA 实验原理与试剂选择指南

ELISA 的基本原理

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种利用抗原抗体特异性结合反应来检测目标分子的免疫学技术。通过酶标记的二抗与底物反应产生颜色变化，用酶标仪读取 OD 值实现定量。

ELISA 的主要类型

双抗体夹心法

最常用的 ELISA 形式，适合检测大分子抗原。用捕获抗体包被板子，样品中的抗原与捕获抗体结合，再加入酶标记的检测抗体形成”三明治”结构。灵敏度高、特异性好。

直接法

抗原直接吸附在板子上，用酶标记的一抗检测。操作简单但灵敏度较低，且每种目标分子需要单独标记的抗体。

间接法

常用于检测抗体。先用抗原包被，再加入样品中的抗体（一抗），最后用酶标记的二抗检测。需要较长的孵育时间，但信号有放大作用。

试剂盒选择要点

板子类型

高蛋白结合力的板子适合大多数应用。注意不同品牌的板子结合力可能有差异，必要时需要做预实验验证。

抗体配对

双抗体夹心法需要两对抗体：一对抗原捕获，一对抗原检测。两对抗体必须识别同一抗原的不同表位，否则会相互竞争影响结果。

校准品与标准曲线

标准品的浓度范围应覆盖待测样品的预期值。注意标准品的基质应与样品基质一致，否则可能产生基质效应。

常见试剂盒规格

市售 ELISA 试剂盒通常提供 48 孔、96 孔或 384 孔规格。96 孔是最常用的规格，兼顾通量和样品用量。