ELISA 实验原理与试剂选择指南

ELISA 的基本原理

ELISA（酶联免疫吸附测定）利用抗原抗体结合检测目标分子。酶可直接标记检测抗体，也可标记识别检测抗体的二抗；加入底物后测量信号，再结合标准曲线或对照解释结果。具体步骤取决于直接法、间接法、夹心法或竞争法。

ELISA 的主要类型

双抗体夹心法

夹心法适用于能被两种抗体分别识别不同表位的目标抗原。捕获抗体固定目标后，检测抗体结合另一个表位；检测抗体可直接带酶，也可由酶标二抗识别。目标分子太小或缺少两个可同时结合的表位时，应评估竞争法等其他形式。

直接法

抗原直接吸附在板子上，用酶标记的一抗检测。操作简单但灵敏度较低，且每种目标分子需要单独标记的抗体。

间接法

常用于检测抗体。先用抗原包被，再加入样品中的抗体（一抗），最后用酶标记的二抗检测。需要较长的孵育时间，但信号有放大作用。

试剂盒选择要点

板子类型

高蛋白结合力的板子适合大多数应用。注意不同品牌的板子结合力可能有差异，必要时需要做预实验验证。

抗体配对

双抗体夹心法需要一对相互匹配的抗体：一种用于捕获，另一种用于检测，两者应能同时结合目标抗原的不同表位。若检测抗体未直接标记酶，还可能需要额外的酶标二抗；选购时核对试剂盒是否已验证该抗体组合，以及是否适用于样品基质。

校准品与标准曲线

标准品的浓度范围应覆盖待测样品的预期值。注意标准品的基质应与样品基质一致，否则可能产生基质效应。

常见试剂盒规格

市售 ELISA 试剂盒通常提供 48 孔、96 孔或 384 孔规格。96 孔是最常用的规格，兼顾通量和样品用量。

参考资料

• Abcam Sandwich ELISA protocol：捕获与检测抗体的作用、表位要求，以及直接酶标或由二抗检测的两种方式。具体孵育和洗涤条件仍应以所用试剂盒说明书为准。