快速判断
先确认这 4 件事
最可能原因
背景高通常先看洗涤、封闭、抗体/底物浓度和样本残留。
怎么确认
比较空白、阴性和样本孔/膜的背景分布,是全局偏高还是局部异常。
立刻处理
先加强洗涤并降低信号放大相关试剂浓度,再逐项恢复条件。
下次避免
固定洗涤体积、次数和孵育时间,试剂批次变化时做小规模预实验。
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背景高但目标条带弱时,要先降低非特异背景,再检查样品量、转膜效率、抗体效价和目标蛋白表达。
背景高通常先看洗涤、封闭、抗体/底物浓度和样本残留。
比较空白、阴性和样本孔/膜的背景分布,是全局偏高还是局部异常。
先加强洗涤并降低信号放大相关试剂浓度,再逐项恢复条件。
固定洗涤体积、次数和孵育时间,试剂批次变化时做小规模预实验。