参数速查

🔬 Western blot 一抗二抗稀释参考表

按抗体货号与检测体系核对稀释、封闭和孵育条件，避免用抗体类别替代产品说明。

参考说明

一抗是否识别修饰、二抗是否荧光标记，并不能单独决定稀释倍数或稀释液。先找到具体货号的 WB 验证条件，再把封闭、抗体孵育和洗涤分开记录。

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对象 / 步骤	必查字段	应避免的通用结论
一抗	厂商、货号、批次、样品物种、WB 应用、推荐稀释与阳性对照	不能把内参统一设为一个倍数，或按单抗/多抗判断最优浓度
修饰特异性抗体	产品指定的封闭与抗体稀释液；是否有样品处理要求	不能把所有磷酸化、糖基化或乙酰化抗体都规定为 BSA
HRP 二抗	一抗宿主、目标 Ig 类型、交叉吸附、推荐稀释与显色底物	不用“二抗不要 BSA”替代具体说明
荧光二抗	标记物、通道、膜、封闭与抗体稀释液、成像仪设置	不能一律禁止 Tween；不同步骤的要求可能不同
封闭 / 孵育 / 洗涤	各步分别记录缓冲体系、添加剂、时间与温度	不把封闭液要求直接套到所有后续步骤

CST Western blot 方案要求参考具体抗体说明中的推荐条件。它是 CST 体系的查询入口，不支持本页替所有抗体给一个“常规 1:1000”。

LI-COR 近红外检测方案区分封闭、抗体稀释和洗涤，并使用含 Tween 的相关试剂。因此“含吐温就影响荧光，所有步骤都不能加”不成立；应按该方案和所用具体试剂核对。

关于奶粉，CST 专文解释了磷酸化抗体与封闭剂的选择，不能归因为“奶粉中的磷酸酶会普遍切除修饰”。选 BSA 或奶粉仍以该抗体的验证条件为起点。

抗体体积 = 工作液终体积 ÷ 稀释倍数。例如终体积 10 mL、按已选产品要求作 1:1000 稀释，算术上对应 10 µL 抗体，再补足终体积；示例不代表推荐该倍数。

背景高或无信号时，先核对对照、曝光和转膜，再记录一次改变的参数。可结合WB 背景排查判断，不能直接把所有弱信号都处理为加浓抗体。

CST 方案对应具体抗体条件，LI-COR 方案对应近红外检测步骤，CST 专文对应奶粉/BSA 选择的解释；未外推为通用孵育参数。核对日期：2026-11-04。

如果当前工具没有覆盖你的参数、样品类型或异常现象，可以把具体实验条件发过来，后续优先补成模板或排查页。