实验前准备
试剂平衡
所有试剂包括样品，使用前需平衡至室温。温度差异会影响反应动力学，导致孔间变异增大。
耗材准备
准备足够的移液器吸头，不同试剂更换新吸头避免交叉污染。准备好废液容器和吸水纸。
加样技巧
准确加样
使用校准过的移液器，选择合适量程的吸头。加样时保持移液器垂直，避免挂壁。加样速度保持一致，减少孔间时间差异。
避免气泡
吸液时慢吸慢打，排液时抵住孔底后放松。加样后检查每孔是否有气泡，有气泡时用针头挑破或轻弹板底。
边缘效应处理
板边缘孔易受温度不均影响导致读值偏高或偏低。常规操作时留空边缘孔，或用稀释液填充边缘孔作为空白。
孵育要点
温度控制
大多数 ELISA 在 37°C 或室温孵育。37°C 孵育时建议用湿盒防止蒸发。将板子放入密封袋或塑料盒内置于培养箱。
时间控制
各步骤孵育时间应严格一致。可用计时器提醒，避免超时影响结果。
洗涤要点
洗涤操作
倒掉孔内液体后在吸水纸上拍干，确保无残留洗涤液。用多道移液器或洗板机加入洗涤液，每孔加满但不溢出。
浸泡时间
每步洗涤建议浸泡 30 秒以上，有助于充分去除未结合物质。洗板次数不少于 3 次。
读板注意事项
显色反应完成后尽快加入终止液。加终止液后 30 分钟内完成读板。设置酶标仪的正确波长（常用 450nm，终止后 450nm 或 630nm 参考波长）。
本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。