熔解曲线是什么
熔解曲线（Melting Curve / Dissociation Curve）是 qPCR 扩增结束后，将产物从低温缓慢升温至 95 ℃，同时记录荧光信号变化所得到的曲线。SYBR Green 类染料结合在双链 DNA 上时发出荧光，当温度升至产物 Tm 值时双链解开、染料脱离，荧光骤降。仪器对荧光随温度变化求导，得到熔解峰，每个峰对应一种扩增产物。
为什么熔解曲线重要
它是判断 qPCR 扩增特异性的”质检关”。理想的熔解曲线应当是单一、尖锐、对称的峰，说明只有目标产物。如果出现双峰、肩峰或宽峰，提示存在引物二聚体或非特异扩增，定量结果不可信。TaqMan 探针法因信号只来自探针水解，特异性更高，通常不依赖熔解曲线。
常见误区
- 只看扩增曲线有 S 型就放行：扩增曲线形状正常 ≠ 产物特异，必须看熔解曲线。
- 把引物二聚体峰当成弱阳性：引物二聚体的 Tm 通常较低（70–75 ℃），目标产物 Tm 较高（80–85 ℃），出现低温峰要警惕。
- 不同样本 Tm 微小漂移当成异常：盐浓度、模板杂质会让 Tm 在 ±0.5 ℃ 内浮动，只要峰形单一即可接受。
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- 引物分析工具：评估引物二聚体与 Tm 值。
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本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。