记录长度、GC 含量和末端 5 个碱基中的 GC 数；这些计数不能判断引物是否可用。
每次输入一条序列，不支持批量或成对分析。在线计算
序列仅支持 A / T / C / G；请先核对输入方向及工具说明。
示例结果仅供说明，请先计算再复制。
计算结果
简化 Tm = 2×(A+T)+4×(G+C) °C；未校正盐、镁离子和引物浓度，不提供精确退火温度建议。
长度 16 nt，GC 含量 43.75%，简化 Tm 46 °C，3′ 端末 5 个碱基中 GC 数 2。不评估发卡、二聚体或特异性。
工具说明
适用场景
核对单条 DNA 引物的基础计数：长度、GC 含量、简化 Tm 和 3′ 端末 5 个碱基内的 GC 数。
本工具不进行发卡、自二聚体、异二聚体结构分析，也不判定靶序列特异性。它不会输出“低风险”“通过”或“可以使用”的结论。
输入说明
- 每次输入一条 5′→3′ 序列，仅支持
A/T/C/G，大小写均可。 - 首尾空白会忽略；序列内部的空格、换行、数字和简并碱基会报错。
- 不支持 FASTA、批量序列、成对引物分析或修饰碱基。
- 页面默认展示示例；修改序列后点击“检查基础指标”重新计算。
计算方法与边界
- 长度：碱基总数，单位 nt。
- GC 含量：
(G+C) / 长度 × 100%。 - 简化 Tm：
2×(A+T)+4×(G+C)，单位 °C。这里只按碱基数粗略估算，未考虑序列排列、盐、镁离子、引物浓度和具体反应体系；尤其不能据此评价长序列或带尾引物的实际退火条件。 - 末端 GC 数：统计 3′ 端最后 5 个碱基中的 G/C；不足 5 个时统计全部碱基。这不是末端稳定性、互补性或二聚体风险评分。
简化 Tm 不能直接作为退火温度，结果也不能确认引物是否适用。
示例
输入 ATGCGTACGTTAGCTA，得到长度 16 nt、GC 含量 43.75%、简化 Tm 46°C、3′ 端末 5 个碱基内 GC 数 2。
复制结果会保留基础指标和适用边界，便于记录；不会产生结构分析报告。
外部官方工具
以下链接前往外部网站，其能力不属于 BioHelper：
- IDT OligoAnalyzer：官方提供 Hairpin、Self-Dimer、Hetero-Dimer 等分析选项。需按其要求设置计算条件，使用可能需要登录。
- NEB Tm Calculator：根据其页面要求选择反应条件并复核 Tm / 退火条件，使用需要 JavaScript。
结构预测不等于实验结果。靶序列特异性还需要结合数据库和实际模板独立核查。
推荐阅读
常用模板
- 单条序列示例
相关问题
多重 PCR 扩增抑制
查看排查实验分类：PCR / qPCR
在同一反应管中进行多个基因的扩增时，部分基因信号明显减弱或完全消失。
高 GC 含量模板扩增困难
查看排查实验分类：PCR / qPCR
某些 DNA 模板具有复杂的二级结构，需要添加 DMSO 等添加剂才能正常扩增，但效果不稳定。
无结果 / 信号弱
查看排查实验分类：PCR / qPCR
qPCR 无扩增或 PCR 无条带，多由模板、引物、体系或程序造成。
PCR 阴性对照有条带是什么原因
查看排查实验分类：PCR / qPCR
阴性对照出现条带，多数与污染或引物二聚体有关，必须先区分条带类型。
条带异常
查看排查实验分类：PCR / qPCR
条带拖尾、引物二聚体或熔解峰异常，多与设计和温度条件相关。
引物 Tm 值太高怎么办
查看排查实验分类：PCR / qPCR
引物 Tm 值偏高时，应同时检查长度、GC 含量、3' 端结构和正反向 Tm 匹配，而不是只提高退火温度。
实验里怎么用这个结果
使用 2×(A+T)+4×(G+C) 计数公式，未考虑盐、镁离子、引物浓度和反应体系。
结果不是精确熔解温度，也不能直接作为退火温度。发卡、自二聚体、异二聚体和靶序列特异性需要独立检查，本工具不做这些分析。
请使用工具说明中的外部官方工具，并结合实际反应条件和实验验证。工具不够用？
提交实验场景提交你的实验场景
如果当前工具没有覆盖你的参数、样品类型或异常现象，可以把具体实验条件发过来，后续优先补成模板或排查页。