Western blot 常见问题快速排查表

先用对照把问题分流

同一种外观可能由样品、转膜、抗体或检测条件引起。下面的表格是待验证的排查方向，不能仅凭条带外观判定原因。开始前记录样本与抗体批次、原设备和试剂 SOP、阳性样本、二抗单独对照，以及转膜后膜染色或转后凝胶结果。Bio-Rad Western blot 排查目录也按无条带、弱信号、异常条带和高背景分别组织检查。

何时停下来复核原 SOP

转膜电压、时间、膜材料、抗体稀释和曝光条件都依赖设备、目标蛋白与试剂，不能从这张表中抄用统一数值。若阳性对照、总蛋白或二抗对照本身异常，先修复该对照；在对照有效之前，不宜解释样本间的目标条带差异。需要记录每次只调整了哪个变量，复测后再决定下一步。Bio-Rad Western blot protocol

参考资料

• Bio-Rad Western blot troubleshooting：按现象分类的排查入口。
• Bio-Rad No Bands：转膜验证、阳性样本与抗体排查。
• Bio-Rad Unusual or Unexpected Bands：额外或异常条带的可能来源。
• Bio-Rad Western Blot Doctor：背景问题：全膜与局部背景的区分。
• Bio-Rad Western Blot Protocol：试剂与操作条件的核对边界。