什么是 Bradford 定量：术语解释

什么是 Bradford 定量

Bradford 定量是一种快速比色蛋白浓度测定方法，原理是考马斯亮蓝 G-250 染料在酸性条件下与蛋白结合后，吸收峰从 465 nm（棕红色，游离态）移至 595 nm（蓝色，结合态），OD₅₉₅ 升高与蛋白浓度成正比。Bradford 试剂直接与样品按 1:50（v/v）混合，室温孵育 5 分钟后读 OD₅₉₅，用 BSA 或 IgG 标准曲线（0–2000 µg/mL）反算浓度。整个过程 10 分钟内完成，是 Western blot 上样前定量、蛋白纯化过程中跟踪浓度最常用的快速方法。

实验中为什么重要

Bradford 法相比 BCA 法的优势在于速度快（5 min vs 30 min）、对还原剂耐受（DTT、β-巯基乙醇 <1 mM 不干扰）、对去垢剂部分兼容（Triton X-100 <0.05%、SDS <0.01%）。但其核心短板也是去垢剂敏感：含 0.1% SDS 的细胞裂解液直接测 Bradford 会发生沉淀或显色异常，需改用 BCA 或稀释样品。Bradford 对不同蛋白响应差异大（BSA 与 IgG 在同浓度下 OD₅₉₅ 差 1.5–2 倍），标准品蛋白类型应与样品类型尽量一致：测抗体用 IgG 标准曲线，测细胞总蛋白用 BSA 标准曲线。碱性缓冲液（Tris pH >8.5）会提升背景，需做缓冲液对照扣减。

常见误区

1. 测含 SDS 裂解液不稀释：0.1% SDS 即显著干扰，必须稀释 10 倍以上或改用 BCA。
2. 标准品与样品蛋白类型不匹配：用 BSA 标准曲线测抗体浓度，结果被低估约 30%。
3. 孵育时间不一致：5 min 与 15 min 的 OD₅₉₅ 漂移可达 10%，所有孔需同步读板。
4. 染料沉淀误读：样品含去垢剂时染料-蛋白复合物析出，OD 异常偏高，需离心后取上清读板。

相关工具

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