问题现象
PCR 阴性对照（NTC）本应不含模板，但电泳后却能看到明显条带，或者至少出现稳定的小条带。
优先判断
- 如果阴性对照条带大小与目标产物接近，优先考虑污染
- 如果阴性对照只有很小的条带，优先考虑引物二聚体
- 如果所有孔都出现类似条带，需要先检查体系配制区和枪头使用流程
常见原因
- 上一次扩增产物气溶胶污染
- 配制区、枪头、离心管或水源被模板污染
- 引物自互补或互补导致引物二聚体
- 退火温度过低，导致非特异扩增
- 体系配制时发生交叉污染
排查顺序
- 比较阴性对照条带大小与目标产物大小是否一致
- 更换无核酸水、枪头、离心管和工作区域后重做 NTC
- 检查是否把开过盖的扩增产物带入前处理区域
- 复核引物序列和退火温度
- 必要时降低引物浓度或重设计引物
处理建议
- 先按 PCR 污染怎么排查 的思路做区域清洁和分区
- 用 引物分析工具 检查二聚体风险
- 用 引物退火温度计算 重新设定退火温度范围
什么时候需要重做实验
- 阴性对照条带与目标条带大小接近
- 同批次多个 NTC 都出现相同结果
- 清洁后重复实验仍持续出现污染信号
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本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。