实验排错

qPCR 阴性对照有扩增曲线是什么原因

NTC 出现扩增曲线时,要先区分污染、引物二聚体和阈值设置问题。

PCR / qPCR污染
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qPCR 阴性对照有扩增曲线是什么原因
快速判断

先确认这 4 件事

先排查的方向

先把污染、引物二聚体和阈值误判分开,不要直接修改样本分析结果。

怎么确认

看 NTC 的 Ct 值、扩增曲线形态和熔解曲线;二聚体通常 Ct 偏晚,熔解峰也会和目标峰不同。

下一步

先重配 NTC 和反应体系,分开检查水、引物、Master Mix 和加样区域。

下次避免

下次把配液区、模板区和扩增产物区分开,NTC 每板保留,并记录异常孔位。

从现象开始

逐步检查,再决定下一步

从曲线形态、熔解峰、试剂污染、引物二聚体和操作交叉污染五个角度判断 qPCR NTC 扩增来源。

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