参数速查
🧪 常用缓冲液配方速查表
TAE、TBE、PBS、TBS、TBST、RIPA、SDS-PAGE 电泳与转膜缓冲液等常用配方、用途、pH 与注意事项速查表。
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工具说明
适用场景
配制核酸电泳、蛋白免疫印迹、细胞洗涤和蛋白裂解等常用缓冲液时，需要快速核对各组分配方、工作浓度、pH 范围和配制要点。 本表覆盖分子生物学实验室最常用的 10 种缓冲液，适合在配液、排查电泳异常或 WB 背景问题时直接对照查阅，避免因配方记错、pH 偏移或稀释倍数搞反导致实验失败。
参数速查表
| 缓冲液名称 | 配方 | 用途 | pH | 注意事项 |
|---|---|---|---|---|
| TAE (50×) | Tris 242 g + 冰乙酸 57.1 mL + 0.5 M EDTA (pH 8.0) 100 mL，定容至 1 L | DNA 琼脂糖凝胶电泳（常规 + 回收） | 8.3 | 缓冲能力较弱，长时间电泳需循环；回收 DNA 优先用 TAE |
| TBE (5×) | Tris 54 g + 硼酸 27.5 g + 0.5 M EDTA 20 mL，定容至 1 L | 小片段 DNA 电泳、高通量测序前处理 | 8.3 | 分辨率高、缓冲强；硼酸会抑制后续酶反应，回收需纯化 |
| PBS (10×) | NaCl 80 g + KCl 2 g + Na₂HPO₄ 14.4 g + KH₂PO₄ 2.4 g，定容至 1 L | 细胞洗涤、免疫染色、稀释缓冲 | 7.4 | 含磷酸盐，会抑制碱性磷酸酶（AP），AP 显色勿用 |
| TBS (10×) | Tris 24.2 g + NaCl 80 g，HCl 调 pH 7.6，定容至 1 L | Western blot 洗膜、AP 显色系统 | 7.6 | 不含磷酸盐，适合 AP 系统显色；与 TBST 配套使用 |
| TBST | 1× TBS + 0.1% Tween-20 | Western blot 洗膜、封闭稀释 | 7.6 | Tween-20 浓度过高影响抗原抗体结合，0.05%–0.1% 为宜 |
| PBST | 1× PBS + 0.1% Tween-20 | 免疫染色（IHC/ICC/IF）洗涤 | 7.4 | 洗片和细胞染色常用；勿用于 AP 显色末步，磷酸盐会抑制酶 |
| RIPA 裂解液 | 50 mM Tris-HCl + 150 mM NaCl + 1% NP-40 + 0.5% 脱氧胆酸钠 + 0.1% SDS | 总蛋白裂解提取 | 7.4–8.0 | 现用现加蛋白酶抑制剂（PMSF/Cocktail）；冰上裂解 30 min |
| Loading buffer (5× SDS-PAGE) | 250 mM Tris-HCl (pH 6.8) + 10% SDS + 50% 甘油 + 0.5% 溴酚蓝 + 0.25 M DTT | 蛋白上样 | — | DTT 现加或分装 −20 °C 保存；不含 DTT 的版本可加 β-巯基乙醇替代 |
| 电泳缓冲液 (1× Tris-Glycine-SDS) | 25 mM Tris + 192 mM 甘氨酸 + 0.1% SDS | SDS-PAGE 凝胶电泳 | 8.3 | 配 5× 母液更省事；电泳过程中 pH 会偏移，长时间跑需换液 |
| 转膜缓冲液 (湿转) | 25 mM Tris + 192 mM 甘氨酸 + 20% 甲醇 | 湿转印迹（蛋白转 PVDF/NC 膜） | 8.3 | 甲醇提高小分子蛋白结合但影响大分子转出；大分子可降至 10% 甲醇或 0.05% SDS |
使用注意
- Tris 缓冲液的 pH 随温度变化显著（温度升高 pH 下降），调 pH 必须在使用温度下进行；25 °C 调好的 Tris-HCl 在 4 °C 会偏移约 0.03 pH/°C。
- 含磷酸盐的缓冲液（PBS、PBST）不能直接用于后续酶反应体系，磷酸根会抑制限制酶、碱性磷酸酶等；需先乙醇沉淀或柱纯化。
- TAE 与 TBE 不可混用：TAE 缓冲弱、利于回收；TBE 缓冲强、分辨率高但硼酸残留影响连接和酶切，回收样本必须纯化后再用。
- SDS-PAGE 电泳缓冲液若重复使用超过 3 次，pH 和电导率变化会导致条带弥散、前沿变型，建议每次或每 2 次更换。
- 转膜缓冲液中甲醇需现加，长时间存放的甲醇-Tris-甘氨酸缓冲液会出现 pH 漂移和沉淀，影响转膜效率。
- RIPA 裂解液配方因研究目的可调整：温和裂解去 SDS 保膜蛋白构象，强裂解加 SDS 提高难溶蛋白回收；蛋白磷酸化检测务必加磷酸酶抑制剂。
- 5× SDS-PAGE Loading buffer 配好后分装 −20 °C 避光保存，含 DTT 的版本反复冻融会氧化失效，建议 50 µL 小份分装。
常见问题
PBS 和 TBS 能否互相替代？
看下游实验。两者都可用于细胞洗涤和免疫染色，但 PBS 含磷酸根会抑制碱性磷酸酶（AP）；做 AP 显色系统、AP 偶联二抗实验必须用 TBS。做 HRP 显色系统两者均可，但 TBS 对某些膜蛋白抗体信噪比更优。
TAE 和 TBE 怎么选？
短片段（< 1 kb）高分辨率电泳优先用 TBE，缓冲能力强、条带更锐利；回收 DNA 或跑长片段优先用 TAE，缓冲弱但不含硼酸，回收后无需额外纯化即可用于酶切和连接。TBE 跑完的回收样本必须过柱或乙醇沉淀去除硼酸。
RIPA 裂解液能提取膜蛋白吗？
可以提取总蛋白，但对强疏水性膜蛋白回收率偏低。若研究膜蛋白，建议降低 SDS 浓度（0.05%–0.1%），或改用含 1% Triton X-100 的温和裂解液以保构象表位；蛋白磷酸化检测必须加磷酸酶抑制剂（NaF、Na₃VO₄）。
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