参数速查

🧬 PCR 引物设计参数速查表

按设计、热力学与特异性分别核对 PCR 引物，提供官方工具入口与需要记录的计算条件。

参考说明

引物长度或 GC 含量正常，不代表没有二聚体，也不代表只扩增目标。本页按设计、结构和特异性整理检查项，不用一组通用阈值给出“合格”结论。

窄屏可左右滑动表格；也可聚焦表格后使用左右方向键。

检查项	要记录的输入或输出	合适的工具与边界
基础计数	5′→3′ 序列、长度、GC%、3′ 端序列；注明修饰与简并碱基	本站基础分析仅计数与简化 Tm，不分析结构
Tm 与成对比较	算法、寡核苷酸浓度、Na⁺、Mg²⁺、dNTP；上下游使用相同条件	IDT OligoAnalyzer可输入这些条件；不能直接混比不同默认设置
发卡	结构、预测温度、末端位置与计算条件	OligoAnalyzer Hairpin；不要用无单位 ΔG 数字代替判断
自二聚体 / 异二聚体	分别分析单条自身和两条之间的配对，记录 3′ 端相关结构	OligoAnalyzer Self-Dimer / Hetero-Dimer；“≤3 分子配对”不是本页认可的判定规则
特异性	目标 accession、物种、数据库、预期产物与可能非目标匹配	NCBI Primer-BLAST；需选择与实验对应的数据库
反应条件	聚合酶/缓冲液型号、目标片段与厂商 Tm/退火计算要求	按该产品验证，不把 Wallace 计数值直接作为退火温度

IDT 的使用说明强调按实际 Mg²⁺、dNTP 等条件计算。订购单上的 Tm 和反应体系中的计算值可能使用不同默认设置。

Primer-BLAST 方法说明说明它结合 Primer3 设计与数据库筛查；结构预测和特异性筛查解决不同问题，不能互相替代。PCR/qPCR 的设计目标、额外 5′ 序列和基因组/转录本范围也应在记录中注明。

二聚体问题可结合引物二聚体排查复核；比较长度、Tm 或 ΔG 时，先明确实验目标、算法与计算条件，再决定是否调整序列。

IDT 官方工具及使用说明支持热力学输入与三类结构功能；NCBI 官方方法说明支持特异性检查范围。核对日期：2026-11-04。

如果当前工具没有覆盖你的参数、样品类型或异常现象，可以把具体实验条件发过来，后续优先补成模板或排查页。