退火温度怎么定：PCR / qPCR 参数解释

退火温度影响什么

退火温度主要影响引物与模板结合的稳定性。温度低时更容易扩增，但非特异风险上升；温度高时更特异，但目标产物也可能明显下降。

如何初步估算

常规做法是以引物 Tm 为起点，再结合扩增长度、模板复杂度和体系类型微调。两条引物的 Tm 差异不宜过大，否则程序窗口会变窄。

实验中如何优化

最稳妥的方式是做温度梯度。若出现无条带、双峰或引物二聚体，优先考虑把退火温度作为第一批调整参数之一。