内参或阳性对照正常时，优先排查目标蛋白表达和抗体。
适用场景
遇到以下现象时，建议按下面的排查顺序逐步缩小范围，而不是一次性同时调整多个变量。
- 目标蛋白无条带
- 内参正常但目标缺失
- 整膜无信号
01
先区分整膜无信号还是目标无信号
Marker、总蛋白染色、内参或阳性对照是否正常？
整膜无信号时，先排查转膜、抗体孵育和显色系统。
可能原因
- 转膜失败
- 抗体漏加
- ECL 失效
推荐处理方式
- 查看转膜后膜和胶
- 确认抗体孵育记录
- 用阳性样本复测
02
确认样品中目标蛋白是否存在
样本来源、处理条件和裂解方式是否能保留目标蛋白？
样品可信时，再检查上样量和抗体。
目标表达低、降解或裂解不充分都会导致无条带。
可能原因
- 表达量低
- 蛋白降解
- 亚细胞定位导致提取不足
推荐处理方式
- 增加阳性对照
- 加入蛋白酶抑制剂
- 优化裂解条件
03
复核上样量和转膜条件
上样量是否过低？目标分子量对应的转膜时间是否合适？
上样和转膜合理时，继续看抗体识别。
低丰度目标、过转或转膜不足都会让目标信号消失。
可能原因
- 上样量低
- 大分子转膜不足
- 小分子过转
推荐处理方式
- 调整上样量
- 优化转膜时间
- 必要时做总蛋白染色
04
检查一抗和二抗是否匹配
一抗物种、二抗宿主、稀释倍数和保存状态是否正确？
抗体配置正确时，再检查显色曝光。
二抗不匹配、抗体失效或浓度过低会直接无信号。
可能原因
- 二抗物种不匹配
- 抗体失效
- 稀释过度
推荐处理方式
- 核对说明书
- 降低稀释倍数复测
- 更换阳性验证过的抗体
05
排查显色和曝光链路
ECL 是否新鲜？成像参数是否太保守？
显色正常时，问题更可能来自样品、转膜或抗体。
底物失效或曝光过短会造成假性无信号。
可能原因
- ECL 失效
- 曝光时间过短
- 成像通道设置错误
推荐处理方式
- 更换 ECL
- 增加曝光梯度
- 核对成像通道
复制排查清单
勾选已经完成的步骤后，可以复制一份文字版排查记录，用于实验记录或发给同事复核。
排查清单预览