qPCR Ct 值偏高怎么办？

Ct 高不一定等于失败

如果阴性对照干净、重复孔稳定，Ct 高只说明目标模板偏少或扩增效率偏低，不一定意味着实验完全失败。

优先排查三个来源

1. 模板总量不足或 RNA / DNA 已降解
2. 体系中存在抑制物，导致起始扩增效率下降
3. 引物与程序不匹配，扩增门槛被推迟

如何缩小范围

先做模板复测，再比较阳性对照、阴性对照和重复孔一致性。若只有个别样本 Ct 高，优先怀疑样本质量；若整板都偏高，则先看体系和程序。