如果 Marker 和阳性对照正常，优先排查 PCR 反应本身。
适用场景
遇到以下现象时，建议按下面的排查顺序逐步缩小范围，而不是一次性同时调整多个变量。
- PCR 无目标条带
- 加样后 Marker 正常但样品空白
- 阳性对照或重复结果不稳定
01
先确认电泳和 Marker 是否正常
Marker 是否清晰？阳性对照是否有条带？
如果 Marker 或阳性对照异常，先排查胶、缓冲液、电压和上样问题。
可能原因
- 电泳系统异常
- 胶浓度不合适
- 缓冲液或染料失效
推荐处理方式
- 更换新鲜缓冲液
- 复核胶浓度
- 用阳性模板复跑电泳
02
检查模板是否可扩增
模板浓度、纯度和完整性是否满足实验要求？
模板质量基本可信，继续检查引物和体系设置。
模板降解、浓度过低或抑制物偏多时，PCR 可能完全无产物。
可能原因
- 模板浓度不足
- 降解
- 提取残留抑制物
推荐处理方式
- 重新定量模板
- 必要时重新提取
- 统一模板输入量
03
核对引物与退火条件
引物是否加错、退火温度是否过高、引物是否存在明显设计风险？
引物和退火温度没有明显问题，再检查体系和程序。
引物缺失、退火温度偏高或引物互补都可能导致无条带。
可能原因
- 引物漏加或保存失效
- 退火温度偏高
- 引物设计不佳
推荐处理方式
- 复核引物工作液
- 下调退火温度
- 检查引物二聚体风险
04
复核 PCR 体系配置
Buffer、酶、引物、模板和补水体积是否都配置正确？
体系记录明确时，再看循环程序是否合理。
关键组分漏加或体积错误，会直接导致完全不扩增。
可能原因
- 漏加酶
- buffer 倍数错误
- 模板或引物体积填错
推荐处理方式
- 重新核对体系
- 优先配主混液
- 使用工具重新计算每个组分
05
检查循环程序和片段长度匹配
退火时间、延伸时间和循环数是否适合当前模板与片段长度？
如果程序也合理，再考虑高 GC、特殊模板或需要重做实验。
延伸时间过短、循环数不足或程序模板选错时，也会无条带。
可能原因
- 延伸时间不足
- 循环数偏少
- 程序设错
推荐处理方式
- 增加延伸时间
- 适度增加循环数
- 必要时重建程序模板
复制排查清单
勾选已经完成的步骤后，可以复制一份文字版排查记录，用于实验记录或发给同事复核。
排查清单预览