什么是 BCA 定量：术语解释

什么是 BCA 定量

BCA 定量（Bicinchoninic Acid Assay，BCA 法）是一种基于比色法的蛋白浓度测定方法，原理分两步：在碱性环境下，蛋白将 Cu²⁺ 还原为 Cu⁺（Biuret 反应），Cu⁺ 与 BCA（二辛可宁酸）形成在 562 nm 处有强吸收的紫色络合物，颜色深浅与蛋白浓度成正比。BCA 试剂 A（含 BCA、碳酸钠、酒石酸钠）与试剂 B（含硫酸铜）按 50:1 混合成工作液，与样品 37℃ 孵育 30 分钟后读 OD₅₆₂，用 BSA 标准曲线（0–2000 µg/mL）反算浓度。BCA 对去垢剂耐受好，是含 SDS、Triton X-100、NP-40 等去垢剂样品的首选定量方法。

实验中为什么重要

蛋白定量是 Western blot 上样、酶活测定、蛋白互作分析的基础前提，定量不准会导致上样不均、信号失真、结论错误。BCA 法相比 Bradford 法的核心优势是对去垢剂耐受（0.5–5% SDS 不显著干扰），非常适合细胞裂解液、洗脱液、膜蛋白样品等含去垢剂体系。但其对还原剂敏感：DTT、β-巯基乙醇 >1 mM 会显著干扰（还原 Cu²⁺ 产生假阳性），需用试剂盒配套的还原剂兼容型试剂（如 Pierce BCA Kit 的 RC-BCA）或先沉淀去除还原剂。BCA 受温度影响明显，37℃ 孵育温度波动 ±2℃ 会导致 OD 漂移，建议用恒温培养箱而非水浴。

常见误区

1. 用 Bradford 测含 SDS 裂解液：SDS 严重干扰 Bradford 显色，应改用 BCA 或稀释到干扰阈值以下。
2. 还原剂未去除：含 5 mM DTT 的样品直接测 BCA，OD 异常偏高。
3. 标准曲线范围不匹配：样品浓度超出 0–2000 µg/mL 线性范围，需稀释重测。
4. 只测单孔：BCA 孔间变异约 5–10%，建议标准品和样品均做复孔取均值。

相关工具

• OD260 浓度计算器：核酸 / 蛋白浓度换算辅助工具。

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