输入量合理时，继续排查裂解和纯化步骤。
适用场景
遇到以下现象时，建议按下面的排查顺序逐步缩小范围，而不是一次性同时调整多个变量。
- DNA/RNA 浓度低
- A260/280 或 A260/230 异常
- 下游 PCR/qPCR 被抑制
01
先确认样本输入是否足够且一致
样本量、细胞数、组织质量或起始体积是否低于试剂盒建议范围？
输入量过低或样本保存差会直接导致得率低。
可能原因
- 起始样本不足
- 样本降解
- 冻融次数多
推荐处理方式
- 标准化输入量
- 减少冻融
- 记录样本保存时间和条件
02
检查裂解是否充分
组织是否完全破碎？细胞团块是否残留？裂解时间和温度是否符合说明书？
裂解充分时，再看结合和洗涤环节。
裂解不足会让核酸留在样本残渣中。
可能原因
- 匀浆不足
- 裂解液比例不够
- 蛋白/多糖干扰
推荐处理方式
- 延长裂解
- 增强匀浆
- 按样本类型调整裂解液比例
03
复核结合、洗涤和离心条件
乙醇比例、柱结合时间、洗涤次数和离心速度是否正确？
纯化条件正确时，继续看洗脱和定量。
乙醇比例或洗涤残留错误会同时影响得率和纯度。
可能原因
- 乙醇漏加
- 盐残留
- 柱膜过载
推荐处理方式
- 核对乙醇添加记录
- 增加干柱离心
- 避免超过柱容量
04
优化洗脱体积和洗脱方式
洗脱体积是否太大？洗脱液是否充分覆盖柱膜？
洗脱合理时，浓度低可能来自样本或测量方式。
洗脱体积过大导致浓度低，覆盖不足会降低总回收量。
可能原因
- 洗脱体积过大
- 洗脱液未覆盖膜
- 未预热洗脱液
推荐处理方式
- 减少洗脱体积
- 室温静置后离心
- 必要时二次洗脱
05
区分真实低纯度和测量误差
Nanodrop、Qubit 和电泳结果是否一致？A260/230 是否偏低？
多种方法一致时，结果可信，可以继续优化提取。
光度法受污染物影响大，可能高估或低估核酸质量。
可能原因
- 盐/酚/胍盐残留
- 蛋白污染
- 光度法干扰
推荐处理方式
- 用荧光法复核
- 跑胶看完整性
- 必要时做二次纯化
复制排查清单
勾选已经完成的步骤后，可以复制一份文字版排查记录，用于实验记录或发给同事复核。
排查清单预览