核酸浓度测定与质量判断

浓度测定方法对比

紫外吸收法（如 NanoDrop）速度快，也能给出吸收光谱和 A260/280、A260/230 比值；但它测量的是吸光度，不能单独区分目标核酸与其他吸收物。针对 DNA 或 RNA 的荧光染料法选择性更高，尤其适合低浓度样本或对输入量敏感的下游实验。电泳或片段分析用于看完整性和片段分布，不能由浓度数值替代。

NanoDrop 的读数解读

NanoDrop 根据 260 nm 吸光度及仪器的光径校正估算浓度。常见换算系数见OD260 核酸浓度计算器；若仪器已报告按 1 cm 光径标准化的读数，不要再次校正。吸收比值是质量线索，解读时应同时查看完整光谱、空白对照和样本类型。

A260/280 异常的原因

比值偏低可能与蛋白、酚等杂质有关，也可能受空白液不匹配或低浓度噪声影响。先重新空白并复测；不要仅凭一个比值指定某种污染物或直接决定重提。

A260/230 异常的原因

A260/230 偏低可能提示提取试剂或盐类残留，但不同试剂及背景校正会改变读数，无法按固定比值反推出特定污染物。若后续 PCR、测序或酶反应也异常，再结合提取流程、稀释试验与适当的纯化步骤判断。

Qubit 的使用场景

荧光染料法使用针对特定核酸类型的试剂，通常比紫外吸收法更适合低浓度样品和文库构建等场景，但仍应遵守对应试剂盒的检测范围、标准品与样本稀释要求。两种方法结果不同时，先确认测的是同一种分子，并排查污染、样本浓度与空白设置。

选择方法的简表

参考 Thermo Fisher 核酸定量方法概览和荧光定量与紫外吸收比较。