核酸浓度测定与质量判断

浓度测定方法对比

核酸浓度测定常用 NanoDrop 分光光度计和 Qubit 荧光定量仪两种方法。NanoDrop 快速便捷，Qubit 更准确且不受杂质干扰。

NanoDrop 的读数解读

NanoDrop 通过 260nm 吸光度计算核酸浓度。纯净 DNA 的 A260/280 应在 1.8-2.0 之间，纯净 RNA 应在 2.0-2.2 之间。A260/230 应大于 2.0，低于此值提示存在酚、胍盐或糖类残留。

A260/280 异常的原因

比值偏低通常意味着蛋白或酚残留，需要重新抽提。比值偏高不常见，可能与 RNA 降解后核苷酸释放有关。

A260/230 异常的原因

比值偏低是最常见问题。酚残留会使比值降到 1.0 以下，胍盐残留比值在 1.5-2.0 之间，糖类残留比值约 1.5。严重偏低时需要重新纯化。

Qubit 的使用场景

Qubit 使用荧光染料而非紫外吸光度，不受杂质干扰，适合检测低浓度样品或需要精确定量的下游应用（如文库构建、NGS）。操作时注意校准品和样品测定要分开进行。