RNA 提取完整流程与 RNase 防控要点

RNA 提取的基本流程

RNA 提取的核心步骤包括：样品处理、细胞裂解、有机抽提去除蛋白、酒精沉淀洗涤、RNA 溶解与保存。每一步都需要注意 RNase 防控。

为什么 RNase 控制是核心

RNase 是极其稳定的酶，即使微量残留也会快速降解 RNA。RNase 存在于皮肤、空气、试剂和器具表面，需要全程防控。

操作中的关键控制点

实验前准备

所有耗材需用 0.1% DEPC 水处理或购买无 RNase 规格。操作者需佩戴口罩和手套，避免说话和直接接触样品。试剂配制用水需经 DEPC 处理。

裂解步骤

组织或细胞加入裂解液后需充分匀浆，确保核酸与蛋白分离彻底。裂解液中的胍盐不仅能裂解细胞，还能抑制 RNase 活性。

抽提与沉淀

有机抽提后水相转移时注意不要吸到中间层蛋白。酒精沉淀后离心去上清时控制力度，避免搅动沉淀。RNA 沉淀用 DEPC 水或专用的 RNA 溶解液重悬。

保存条件

提取的 RNA 应立即放置于 -80°C 保存，避免反复冻融。建议分装成小体积，使用时取出一管，减少整管 RNA 的冻融次数。