核酸电泳上样前要检查哪些细节

上样失败很常见

很多“电泳问题”其实发生在上样前后，比如样品太稀、体积太大、loading buffer 比例不合适，或者枪头把孔底刺破。

上样是最容易被当成“熟练动作”忽略的一步，但它对条带清晰度和重复性影响非常直接。

根据目标体积和工作浓度，快速计算 Buffer 原液与补液体积。

根据目标上样质量或体积，快速反推样品与 loading buffer 的加入量。

排查向导

围绕样品质量、上样量、胶浓度、缓冲液和跑胶电压，快速定位核酸电泳条带弥散问题。

下一步排查

电泳无条带不一定是扩增失败，样品上样、染料、缓冲液和电压条件也都可能让条带“消失”。

条带弥散通常和样品质量、上样量、胶浓度以及缓冲液状态有关，需要先判断是样品问题还是分离条件问题。

很多跑胶问题并不来自样品本身，而来自缓冲液配制错误、旧 buffer 重复使用或上样操作不稳定。

如果 marker 本身就模糊，优先怀疑跑胶体系、染料状态或 marker 保存，而不是直接判断样品失败。

本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。