什么时候算“扩增效率低”
理想扩增效率通常在 90% 到 110% 之间。若标准曲线斜率明显偏离、重复孔差异大，或 Ct 与模板梯度不成比例，就应优先检查扩增效率。
先看模板和标准品
低效率最常见的原因是模板降解、标准品浓度计算错误或系列稀释不稳定。先确认模板完整性，再复核标准品梯度是否按同一体系连续配制。
再看引物和体系
如果引物长度、GC 分布或退火温度不合适，也会让扩增曲线整体变“平”。同时注意 Mg²⁺、引物浓度、酶量和模板输入量是否超出推荐范围。
最后检查程序和基线
退火温度过高、延伸时间不足、循环数不够，都会表现为效率低。完成体系检查后，再回到仪器分析参数，确认基线和阈值设置是否合理。
本文用于科研实验排查与条件优化，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。