扩增效率低怎么办？| BioHelper

标准曲线斜率异常、效率偏低，通常和模板质量、梯度稀释、引物设计和体系设置有关。

快速判断

先确认这 4 件事

最可能原因

先判断是体系没有成功，还是检测端没有读到信号。

怎么确认

检查阳性对照、内参/Marker/标准品是否正常，再回看样本质量和反应条件。

立刻处理

用已验证样本或阳性对照复跑，同时复核关键试剂、加入量和程序参数。

下次避免

每次实验保留阳性、阴性和过程对照，方便快速定位是哪一段失效。

优先围绕标准曲线、模板定量和扩增体系做回溯。

继续阅读

用一篇 PLOS ONE 论文看懂 qPCR 内参验证：为什么不能凭习惯选 GAPDH，以及 geNorm、NormFinder、BestKeeper 的结果怎么判断。

用一篇 Scientific Reports 论文看细胞裂解液 RT-qPCR：什么时候可以跳过 RNA 纯化，结果要怎么和经典流程比较。

排查向导

围绕标准曲线、模板质量、引物设计和反应体系，快速判断 qPCR 扩增效率偏低的来源。

推荐工具

根据长度和浓度估算 DNA 或 RNA 的分子拷贝数。

根据 C1V1=C2V2 快速计算原液体积、稀释液体积和最终倍数。

快速计算 PCR 反应体系中的 buffer、引物、模板和酶体积。

根据起始浓度、稀释倍数和步数，快速生成系列稀释方案。

本页用于科研实验现象排查，不替代实验室 SOP、试剂说明书或医学判断。